�Ƽ�����

�Ŵ������������������༭���ּ��������о���ȡ�ý�չ

ʱ�䣺2021��04��25�� �������ࣺ�Ƽ����� ���������

�Ŵ�����������ֽ����Ļ����� ͨ��������ѧ����(������ձ䡢EMS�ձ�)����ȫ����������ͻ���Ѿ���Ϊũ�������ֵij����ֶΣ������о�������ũ����״ͻ�����ɸѡ��Ϊ��ʱ�������� �������(Directed Evolution)��ͨ������Ŀ������ͻ���Ŀ⣬��ʩ��һ��

�����Ŵ�����������ֽ����Ļ���‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍�� ͨ��������ѧ����(������ձ䡢EMS�ձ�)����ȫ����������ͻ���Ѿ���Ϊũ�������ֵij����ֶΣ������о�������ũ����״ͻ�����ɸѡ��Ϊ��ʱ������‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍�� �������(Directed Evolution)��ͨ������Ŀ������ͻ���Ŀ⣬��ʩ��һ��ѡ��ѹ�����ܹ����ٻ��Ŀ��ͻ����‍‌‍‍‌‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‌‍‍‍‌‍‍‍‍‌‍‌‍‌‍‌‍‍‌‍‍‍‍‍‍‍‍‍‌‍‍‌‍‍‌‍‌‍‌‍�� Ŀǰ��ֲ�����Ķ������ͨ����ͨ���״�PCR��DNA�ϳɻ�DNA����ȷ������������Ŀ������ͻ���Ŀ⣬��ת�����󳦸˾����ĸ�н��й���ɸѡ��

����Ȼ���������뿪ԭʼ�Ļ������ϸ��������ɸѡ�����Ļ���ͻ����ܲ�������ȫ��ӳ������ֲ���е���ʵ���ܡ� ����Ҫ���ǣ��������Ҫũ����״�޷��ڴ󳦸˾����ĸ�н���ɸѡ�� ��ˣ�����һ����ֲ��ԭλ���л��򱥺�ͻ��͹���ɸѡ�Ķ�������·����������ڼӿ�ֲ�����ּ���Ҫ���ܻ����о��Ľ��̡� ���գ��й���ѧԺ�Ŵ��뷢������ѧ�о����߲�ϼ�о����������о�����������������͵ı��Ͱ�����Դ����ͻ�����༭��STEME������ֲ����ʵ���˻���Ķ�������͹���ɸѡ��

�����о��߽�������Ѱ�øAPOBEC3A���������Ѱ�øecTadA-ecTadA7.10ͬʱ�ں���nCas9(D10A)��N �ˣ�������������������ǻ���øUDG�Ļ��Ե�UGI���ںϻ����ɱ�����ʽ����nCas9 (D10A)��C�ˣ���������4����ʽ��˫����༭��STEME(STEME-1 ��STEME-4)��

����STEME˫����༭��������ֻ��һ��sgRNA�����¾Ϳ����յ���λ��C>T��A>G��ͬʱͻ�䣬���������˰л�����ͻ��ı��Ͷȼ�����ͻ�����͵Ķ����ԡ� STEME-1��ˮ��ԭ��������C>T�յ�Ч�ʸߴ�61.61%��C>T��A>Gͬʱͻ���Ч��Ҳ�ߴ�15.50%�� Ϊ����߰л���ļ�����Ƕȣ��о��߽�һ�������ܹ�ʶ��NG PAM�ı���Cas9-NG �����˵�5 ��˫����༭��STEME-NG������ֻ��Ҫ20 ��sgRNA �Ϳ��Զ�OsACC�ϱ���56�������������ʵ�ֽ����͵�ͻ�䡣

����Ϊ��չʾSTEME��ֲ���еĶ�������������о�������˰���OsACC�Ȼ�ת��ø�ṹ����400��������������е�200��������sgRNA���ֱ𹹽���STEME-1��STEME-NG˫Ԫ�����ϡ� �������õ�˫Ԫ�����Ϊ27��ת���飬ÿ�����ڻ���˵ȷ�������4 ��11 ��sgRNA ���壬����80-142 bp�İ�DNA���򣬱������ת��Ч�ʺ�ͻ��ĸ�ͨ������ ��ũ�˾��鵼��ת��ˮ�����ˣ������Լ6000��ˮ�������硣

����ˮ�෨����10��󣬶�������������Ч�����׺���(Haloxy? fop)����ɸѡ���������ĸ����ݼ�����ͻ��λ�㣺P1927F��W2125C��S1866F��A1884P�� ��W2125C���⣬������������λ��δ����ֲ�����й������� ���У�P1927F��W2125Cͻ��һ�����ֳ�ǿ���ݼ����ԣ����нϸߵ�����Ӧ��DZ�ܡ� ����ͬԴ���׽ṹģ�ͷ������֣���Щ������ͻ��ֱ�ӻ��ӵ�Ӱ���˳��ݼ���Ͽڴ��Ĺ��󣬴Ӷ���������Գ��ݼ����ӵĽ����������ó��ݼ����ԡ�

����ֲ��������ְ֪ʶ��ֲ���ӽ�����������ô��sci�ڿ�

����STEME������ϵ�Ľ���������ԭλ(In situ)�������ֲ�����Դ���ܻ����ṩ�����ͼ���֧�ţ���ũ�������������־�����Ҫ���塣 ���⣬STEMEϵͳ������Ӧ���ڲ�ͬϸ��ϵ����ĸ�����еķDZ�������˳ʽ����Ԫ���ĵ��ء������²�SNV�������Ϳ�ҩλ���ɸѡ�ȡ� ���о��ɹ���2020��1��13�����߷����ڡ���Ȼ-���＼����(Nature Biotechnology)��־(DOI:10.1038/s41587-019-0393-7)��

�����߲�ϼ�о��鲩ʿ����������о�Ա�����Լ�������о��鸱�о�Ա�����Ϊ���Ĺ�ͬ��һ���ߣ��о�Ա�߲�ϼ�������Ϊ��ͬͨѶ���ߡ� �Ŵ�����������о�����п�Ժ΢�����о���������о�������˲����о������� ���о��õ��п�Ժս�����ȵ�ר�������Ȼ����ί�ȵľ���������